細胞凋亡染色試劑盒的使用詳細說明
使用說明 :
一 、 制作標準曲線 ( 測定細胞具體數量時)
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。
2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,每組 3-6 個復孔。
3、接種后培養細胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X 軸) ,OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養時間。 )
二 、 細胞活性檢測
1、在 96 孔板中接種細胞懸液(100?L/孔) 。將培養板放在培養箱中預培養(在 37℃,5% CO 2 的條件下) 。
2、向每孔加入 10?L CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數) 。
3、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。
4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。
三 、 細胞增值- 毒性檢測
1、 在 96 孔板中配置 100 ?L 的細胞懸液。 將培養板在培養箱預培養 24 小時 (在 37 ℃, 5% CO2 的條件下) 。
2、 向培養板加入 10?L 不同濃度的待測物質。 在培養箱孵育一段適當的時間 (例如: 6、 12、 24 或 48 小時) 。
3、向每孔加入 10 ?L CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數) 。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基) ,去掉藥物影響。
4、將培養板在培養箱內孵育 1-4 小時。
5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10?L 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發生變化。
活力計算:.
細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0 加藥)-A(空白)]×100
A(加藥) :具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白) :具有培養基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A(0 加藥) :具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力