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細胞自噬染色檢測試劑盒的使用方法

細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)使用說明

產品說明:自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器,終將吞食物在溶酶體內降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物,損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、病毒和細菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素,是嗜酸性染色劑,通常被用于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑,其檢測激發濾光片波長 355nm。阻斷濾光片波長 512nm。細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法),適用于培養細胞的自噬染色,又稱為 MDC 染色液,可與 EB 合用雙染。

操作步驟(僅供參考):

(一)、MDC單獨染色:

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min,收集細胞,用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中,加入10μl的MDC Stain,輕輕混勻。

5、 室溫避光染色15~45min。

6、 800g離心5min,收集細胞,用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次,棄上清。

7、 加入100μl的Collection buffer重懸細胞,滴加于載玻片上并加蓋玻片。

8、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),計數并拍照。

(二)、與EB雙染色:

1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。

2、 800g離心5min,收集細胞,用300~400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次,棄上清。

3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度10 6 /ml。

4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中,分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液,輕輕混勻。

5、 滴加于在玻片上,室溫避光染色15~30min,加蓋玻片。

6、 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長512nm),計數并拍照。

染色結果:正常細胞 細胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細胞 染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒。

注意事項:

1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性,請小心操作。

2、 吖啶橙染色常與EB染色合用,可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。

3、 操作過程中應注意減少試劑暴露于強光下的時間。

4、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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