淋巴細胞分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡甲胺的混合液。抗凝外周血可在分離液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細胞及其他單個核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。
1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合
2. 無菌轉移3 mlLSM到15 ml離心管中。
3. 混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液 和2 ml 生理鹽水。
4. 仔細的將稀釋血液加入3 mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。
5. 室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細胞和多核白細胞同時可以再LSM上形成一層單核淋巴細胞，如上圖所示。
6. 吸出淋巴細胞上方2-3mm的血漿。
7. 吸取淋巴細胞層以及它下面一半的LSM和轉移到另外的一個離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液淋巴細胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設定在既不損傷細胞又能沉淀細胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡鹽緩沖液清洗細胞，用適當的培養基重懸細胞。
