CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,也就是進行細胞計數的一個盒子。那它的用途也就大致可以猜到,和細胞增殖、細胞毒性相關的實驗都可以。
CCK法的操作步驟:
實驗一:細胞活性檢測
1、在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。將培養板放在培養箱中預培養(37℃,5% CO2)。
2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
5、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。
實驗二:細胞增殖-毒性檢測
1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時(37℃,5% CO2)。
2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。
3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24或48小時)。
4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成氣泡,它們會影響OD值的讀數)。
5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定,吸光度不會發生變化。
注意:如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加CCK之前更換新鮮培養基(除去培養基,并用培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養基),去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。