ELISA試劑盒是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的試驗(yàn)確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過(guò)程看似簡(jiǎn)單，但沒(méi)做到位的話(huà)就會(huì)影響試驗(yàn)的作用。所以在試驗(yàn)過(guò)程中這幾點(diǎn)非常重要：
1、重要的洗刷：
不充分的洗刷會(huì)導(dǎo)致差異和高布景，從而帶來(lái)不抱負(fù)的試驗(yàn)結(jié)果。假如未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)添加布景噪音。有必要的話(huà)，可添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反響。假如布景過(guò)高，置疑洗刷不行時(shí)，能夠測(cè)驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
2、關(guān)鍵的關(guān)閉：
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的時(shí)機(jī)。假如布景過(guò)高，置疑關(guān)閉不充分，那么能夠測(cè)驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或適當(dāng)延伸關(guān)閉時(shí)間。
現(xiàn)在主要有兩種類(lèi)型的關(guān)閉液：蛋白和非離子型去污劑。ELISA試劑盒運(yùn)用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
3、抗體濃度須優(yōu)化：
假如試劑稍有不同，則或許需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了防止這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過(guò)多的一抗或二抗。
4、檢測(cè)試劑要適量：
切勿運(yùn)用過(guò)多的檢測(cè)試劑。假如濃度過(guò)高，ELISA試劑盒或許未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
只要確保每一步操作都做到位，才會(huì)出現(xiàn)的試驗(yàn)結(jié)果。所以ELISA試驗(yàn)的每一步都很重要，不能夠漫不經(jīng)心。
