數據讀取和處理
以夾心法為例
1
推薦使用酶標儀進行雙波長檢測,測定450 nm和630 nm波長下的OD值,并用450 nm的OD測定值減去630 nm的OD測定值。
2
ELISA的樣本和標準品通常要設置1~2個復孔進行檢測,分別求出標準品、樣本吸光度的平均OD值。
3
每個標準品和樣品的OD值應減去空白孔的OD值。
4
以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標準曲線,樣品中待檢物質的含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
結果計算
若使用Origin軟件建立標準曲線,詳細步驟如下:
第一步: 打開軟件,分別在A(X)列和B(Y)列輸入標準品濃度和標準品OD值。
第二步:選擇擬合曲線類型
選中上步輸入的數值,按如下操作依次點擊選項。
第三步:在左側選擇<Find X/Y>,右側勾選< Find X from Y>。完成上述操作后,點擊Fit按鍵,擬合曲線和相關信息將自動生成。
第四步:查看標準曲線信息(如參數值,R-Square等)
第五步:根據標準曲線計算樣本濃度
選擇第四個工作表<Fit NLF Find X from Y1>,在左側A1(Y)輸入樣本的OD值,對應的濃度將在右列自動生成。
注意事項
1. 如果樣本進行了稀釋,計算樣本濃度時請乘以相應的稀釋倍數。
2. 若樣本OD值高于標準曲線上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數。
若使用ELISA Calc軟件建立標準曲線,詳細步驟如下:
第一步:將標準曲線數據在Excel表格中整理成兩列,第一列是濃度,第二列是平均OD值。
第二步:打開ELISA Calc軟件,復制Excel中數值部分,點軟件的<粘貼>;選擇<回歸/擬合模型>,一般優先選擇Logistic曲線擬合(四參數)、直線回歸或二次曲線回歸;點擊<回歸/擬合>。
第三步:點<由Y計算X值>,將樣本OD值在Excel中整理成一列,右鍵選復制,然后點軟件的<粘貼>,點軟件的<復制>,即可將計算的結果到Excel中粘貼。
注意事項
1. 如果樣本進行了稀釋,計算樣本濃度時請乘以相應的稀釋倍數。
2. 若樣本OD值高于標準曲線上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數。