干細胞是一種未充分分化，具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定誘導條件下，可以分化為成骨細胞、成軟骨細胞和成肌細胞等，還可以分化為巨噬細胞、脂肪細胞、內皮細胞和成纖維細胞等骨髓基質細胞，具有發(fā)育為骨、軟骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基質等中胚層組織的潛能。
簡言之，干細胞體外定向誘導分化就是選擇適當的誘導劑和誘導方法，通過誘導劑與細胞表面受體結合或使細胞發(fā)生輕度可逆性損傷等，使被誘導細胞按預定的細胞類型方向分化，然后將這些定向分化的細胞進行分離和培養(yǎng)傳代，從而得到人們所需要的細胞類型。一般的，成骨分化和成脂分化是間充質干細胞MSC必要的功能性鑒定指標。成骨分化經茜素紅染色法鑒定，成脂分化經油紅O染色法鑒定。
Solarbio新增了成骨/成脂誘導迷你化合物Kit，每種Kit均由對應種類經典的可用于誘導的基礎試劑、用于鑒定與分析的高品質染料以及相關試劑組成，具有良好的生物活性。客戶也可以根據自己的實驗需求刪減或添加其他的化合物，也可靈活定制專屬Kit，所有組分均已經過NMR、HPLC或MS檢測，以確保化合物純度和準確性。
產品說明
IK-OIN-1 | 成骨誘導小分子化合物Kit |
IK-LIN-1 | 成脂誘導小分子化合物Kit |
基本操作（僅供參考）
1. 接種骨髓間充質干細胞
取對數生長期的細胞，按照2×104cells/cm2的細胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至相應的融合度（成骨誘導：60~70%；成脂誘導：90~100%），棄掉上清，加入成骨誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、維生素C、茜素紅等）或成脂誘導分化培養(yǎng)基（含有地塞米松、胰島素、吲哚美辛和IBMX）。
2. 細胞分化誘導
成骨誘導：每2~3天更換誘導培養(yǎng)基，于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)，并注意觀察細胞形態(tài)變化（一般約14~28天左右）。根據細胞鈣鹽結晶析出和鈣質結節(jié)形成的情況，決定終止細胞誘導的時間，進行后續(xù)固定和染色鑒定（茜素紅染色）。
成脂誘導：于37℃，5%CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約2~3天，更換為成脂誘導分化培養(yǎng)基維持液（只含有胰島素）培養(yǎng)1天。按照以上換液頻率繼續(xù)誘導（一般是3個循環(huán)，約14天左右），并注意觀察細胞形態(tài)變化。根據細胞誘導形成的脂滴數量和大小，決定終止細胞誘導的時間，并進行后續(xù)固定和染色鑒定（油紅O染色）。
3. 細胞固定
吸去培養(yǎng)基，使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30~60 min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。
4. 染色鑒定
加入適量的染色工作液，染色合適的時間（茜素紅：3~5min；油紅O：靜置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥。
5. 誘導評估與分析
顯微鏡下觀察染色效果，并進行圖像采集和誘導評估。誘導成功時，成骨誘導后的鈣質結節(jié)會與茜素紅染料結合后呈現紅色或橘紅色。成脂誘導后的脂滴會與油紅O染料結合后呈現紅色或橘紅色。
對于成骨誘導還可以進行半定量分析，上述顯微觀察結束后，棄上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室溫下孵育15~60min溶解礦化結節(jié)（茜素紅），然后在562 nm處檢測上清的OD值。
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套裝貨號 | 套裝名稱 | 套裝說明 |
IK-CEA-1 | 細胞激活Kit-1 | 本套裝內含1000×PMA(81μM)、Ionomycin(1.34mM)、Brefeldin A(2mM)的DMSO溶液和Monensin(10.6mM)的EtOH溶液各一支，每支溶液100μL。 |
IK-HIF-1 | 缺氧小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種靶向HIF/HIF Prolyl-Hydroxylase的化合物，可用于細胞氧感應相關的研究，例如：缺氧、氧化應激等。 |
IK-ADC-1 | 抗糖尿病小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種經典的、具有良好生物活性的糖尿病相關化合物，可用于探索糖尿病的相關研究。 |
IK-CA-2 | 腫瘤小分子 化合物Kit-2 | 本套裝精選了數種抗腫瘤化合物和具有促腫瘤活性的化合物，可用于黑色素瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、非小細胞肺癌和乳腺癌等相關研究。 |
IK-TNF-1 | 腫瘤壞死因子TNF小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種靶向腫瘤壞死因子TNF的化合物，可用于抗腫瘤的相關研究。 |
IK-PD-1 | 帕金森小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種靶向多巴胺受體、腺苷受體、腎上腺素受體及單胺氧化酶等，可用于帕金森的相關研究。 |
IK-AD-1 | 阿茲海默癥小分子 化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種靶向Amyloid-β等受體的化合物，可用于阿茲海默癥的相關研究。 |
IK-AB-1 | 常用抗生素小分子化合物Kit-1 | 本套裝精選了數種實驗室常備的抗生素，可用于鑒定藥物靶標的相關研究。 |
G1450 | 茜素紅S染色液(0.2%，pH8.3) | 茜素紅S染色液由緩沖液配制，適合組織和細胞的鈣鹽染色，pH8.3更適用于培養(yǎng)細胞的鈣鹽染色，鈣鹽處有橘黃色或橘紅色沉積，顏色強度取決于鈣鹽含量。 |
G1262 | 油紅O染色試劑盒(細胞專用) | 本試劑盒適用于細胞誘導脂滴染色，可顯示最小的脂滴，可優(yōu)先為脂類從溶劑中吸附染料。標本不采用含有乙醇的固定液，如需要固定可采用10%福爾馬林。脂肪陽性染色結果呈橘黃至紅色，但具體顏色因脂質濃度而定。 |
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