臺盼藍(lán)染液是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性。細(xì)胞損傷或死亡時(shí),臺盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜,與解體的DNA結(jié)合,使其著色。而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。故可以檢測細(xì)胞是否存活。
臺盼藍(lán)染色法的原理
正常的活細(xì)胞,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍(lán),使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi);而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍(lán)染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺盼藍(lán)是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。注意凋亡小體也有臺盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺盼藍(lán)染色后,通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù),就可以對細(xì)胞存活率進(jìn)行比較的定量。
臺盼藍(lán)染色法的操作步驟
材料:
1、顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管;
2、試劑:0.4%臺盼藍(lán)染液;
3、臺盼藍(lán)(Trypan blue):0.4g;
4、生理鹽水:100ml;
操作步驟:
1、用Hanks液配制0.1%臺盼藍(lán)溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞;
3、再加入適量Hanks液制成細(xì)胞懸液;
4、將待染色細(xì)胞稀釋所需濃度(方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同);
5、每0.1ml細(xì)胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴,室溫下染3—5min;
6、染色過的細(xì)胞材料,取一滴細(xì)胞懸液置玻片上,加蓋玻片后放高倍鏡下觀察;
7、死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大,無光澤?;罴?xì)胞不著色并保持正常形態(tài),有光澤;
8、計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中的活細(xì)胞和死細(xì)胞數(shù)目;
9、統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞??砂垂接?jì)算出細(xì)胞活率。
(細(xì)胞活率(%)=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù)×100。)
臺盼藍(lán)染色法注意事項(xiàng):
1、染色時(shí)間不能太長,否則活細(xì)胞也會(huì)逐漸積累染料而染成顏色,使監(jiān)測結(jié)果偏低。
2、另可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法,同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測。
3、有潛在致癌危險(xiǎn),為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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