組織標(biāo)本處理的步驟:取材、固定、脫水、包埋、切片、染色-HE
組織標(biāo)本的處理是簡單基本的工作程序,看起來簡單,認(rèn)真做起來會有很多問題;
1、 取材的問題:厚度:3mm,大小:2x1.5cm;過厚過大固定不透,脫水不透,影響切片染色。
2、 固定液:常用福爾馬林,如果標(biāo)本做免疫組化等其他實驗,用中性福爾馬林固定更好;
3、 固定液體量:要與標(biāo)本容積比:1:9;不可將同一動物的內(nèi)臟放置在一個容器(常用的是試管),固定不透,夏天會發(fā)生腐敗細(xì)胞壞死自溶,不能區(qū)分是毒性作用所致還是溫度高所致。
4、 固定時間:小標(biāo)本4-6H,大標(biāo)本18-24H;固定時間不能過長,經(jīng)常有實驗室為了不同批動物,一起做后續(xù)實驗,把先前的標(biāo)本放置在固定液中,以為固定了就行,做HE染色尚可,但會影響蛋白活性表達(dá),做免疫組化等其他實驗,將會影響結(jié)果;因此,不能過長時間固定,對標(biāo)本脫水包埋處理,包埋成蠟塊后,保存時間可以很長。
5、 特殊標(biāo)本處理:骨骼要脫鈣處理,動物皮毛要去除,而且,要在活體時去毛。否則,動物的毛發(fā)將影響后續(xù)染色觀察。
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