產品名稱:Solarbio-全血基因組DNA提取試劑盒
產品型號:D1850-50
產品特點:Solarbio-全血基因組DNA提取試劑盒使用前請根據使用量準備一些新的容器,將10×紅細胞裂解液用雙蒸水稀釋成1×的即用型紅細胞裂解液(可一次性稀釋完,也可以分次稀釋,一般稀釋后的紅細胞裂解液可保存半年以上)。
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貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 |
D1850-50 | 全血基因組DNA提取試劑系統 | 50ml | 360.00 |
D1850-200 | 全血基因組DNA提取試劑系統 | 200ml | 960.00 |
Solarbio-全血基因組DNA提取試劑盒
使用前請根據使用量準備一些新的容器,將10×紅細胞裂解液用雙蒸水稀釋成1×的即用型紅細胞裂解液(可一次性稀釋完,也可以分次稀釋,一般稀釋后的紅細胞裂解液可保存半年以上)。
使用說明:
自備試劑:異丙醇,75%乙醇
處理血液量 1ml 5ml 10ml
紅細胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
白細胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml
蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
異丙醇 1ml 5ml 10ml
75%乙醇 1ml 5ml 10ml
DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml
1、 樣品的處理(本產品適用于處理新鮮的或已經添加抗凝劑的血液樣品):在血液樣品中加入3倍體積的紅細胞裂解液(請確認已經稀釋過),充分顛倒混勻,12000rpm離心1min(如為大量提取并且為大離心機,可11000轉離心5min),小心吸去上清,再加入2倍體積的紅細胞裂解液,用移液器輕輕吹打沉淀,充分混勻,離心,棄上清,沉淀為白細胞。向沉淀中加500ul(以1ml全血為例)白細胞裂解液,振蕩*混勻(或者用移液器吹打)。
2、65℃水浴10-20min,期間可顛倒離心管混勻數次,直看不見明顯細胞為止。
3、加入1倍體積蛋白沉淀液(以1ml全血為例,加入500ul),充分顛倒混勻,此時會出現白色沉淀,65℃水浴5min,12000rpm離心5min(或者11000轉離心10min),小心吸取上清(沉淀可能在上層,吸取下清),放入一干凈離心管中,如還有沉淀,可再次離心。
4、在上清中加入1倍體積(以1ml全血為例,加入1ml)的異丙醇,混勻。12000rpm離心5min(或者11000轉離心10min),此時可看到管低有少量白色沉淀。小心吸取上清,棄掉。
5、向離心管中加入75%乙醇,12000rpm離心1min(或者11000轉離心2min),輕輕棄去上清液,再次離心,用移液器吸取上清,請不要接觸沉淀。
6、將離心管敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將離心管中殘余的乙醇去除,否則乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。
7、向離心管中加入100-300ul經65℃水浴預熱的DNA溶解液,室溫放置讓DNA自然溶解。如果DNA難于溶解,可室溫放置。
8、DNA電泳檢測。
Solarbio-全血基因組DNA提取試劑盒
注意事項:
1. 樣品應避免反復凍融,否則會導致提取的DNA段較小且提取量也下降。
2. 若試劑盒中的溶液出現沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影響提取效果。
3. DNA濃度及純度檢測:得到的基因組DNA段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰, OD260值為1相當于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會偏低,因為pH值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
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