多聚半乳糖醛酸酶(PG)檢測試劑盒

多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
貨號: BC2660
規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品簡介：
多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase, PG）屬果膠酶的一種，廣泛存在于植物、細(xì)菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果實(shí)軟化、花粉授粉、種子發(fā)育成熟及器官脫落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物時(shí)，可分泌多聚半乳糖醛酸酶來降解宿主細(xì)胞壁，進(jìn)而導(dǎo)致病程發(fā)展。
PG 解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸與 DNS 試劑反應(yīng)生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，測定 540 nm 處吸光值變化可計(jì)算得果膠酶活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計(jì)、低溫臺式離心機(jī)、水浴鍋、1 mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 8 mL×1 瓶，4℃保存。若溶液中有晶體析出，37℃水浴溶解。
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 8 mL 蒸餾水，60℃水浴助溶。
試劑三：液體 20 mL×1 瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 支，10 mg 半乳糖醛酸，4℃保存。臨用前加入 0.943 mL 蒸餾水，配成 50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

操作步驟：

一、粗酶液提取：
組織：按照質(zhì)量（g）: 蒸餾水體積(mL)為 1 : 5~10 的比例（建議稱取約 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，16000 g，離心 10 min，取上清置于冰上待測。
細(xì)菌：先收集細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000︰1 的比例（建議 500 萬個(gè)細(xì)菌加入 1 mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)菌（功率 20%或 200 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時(shí)間 5 min）；然后 4℃，16000 g，離心 10 min 取上清置于冰上待測。
液體：直接檢測或用提取液稀釋后檢測。

二、測定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長 540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將 50 μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋為 10、6、4、3、2、1.5、1.2 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中)

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Functional analysis of the exocyst subunit BcExo70 in Botrytis cinerea》 作者:Wenqing GuanJuan FengRongxia WangZhiwei MaWeixia WangEmail authorKun WangEmail authorTingheng Zhu 期刊:Current Genetics 影響因子:3.464 PMID:31183512
 

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