產品名稱:脫脂奶粉(Westren Blot)
產品型號:D8340
產品特點:脫脂奶粉(Westren Blot)產品編號:D8340 規 格 :10g/100g說明:用于制備微生物培養基;配制ELISA、western等實驗的封閉液。外觀:白色或類白色粉末特性:溶解性:易溶于溫水pH( 25℃):6.3±0.2儲存條件:室溫干燥保存
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脫脂奶粉(Westren Blot)是將鮮牛奶脫去脂肪再干燥而成,脂肪可降低1%左右,其他奶粉成份變化不大。
生產工藝:脫脂奶粉(Westren Blot)的生產工藝流程與全脂乳粉相類似,只是多了一個原料乳脫脂的過程。按熱處理程度進行分類,分類指標為乳清蛋白氮指數(WPNI),乳粉中未變性乳清蛋白的量與熱處理程度成反比。
低熱粉(WPNI>6mg/g乳粉)—72℃/15s或90℃/瞬時
中熱粉(1.5mg/g)
三、western blot中脫脂奶粉的作用
1,封閉
原理:用非抗原的蛋白去封閉膜的蛋白質結合位點,避免標記抗體固定在膜上引起背景增高,常用的封閉液有BSA,脫脂奶粉,明膠, tween-20等,一般脫脂奶粉。
實驗步驟:
5%脫脂奶粉(用1x TBS配制,或1xTBST配制)封閉一晚上 或室溫1~2小時
2,一抗、二抗孵育
原理: 一抗可以與要檢測的蛋白特異結合,二抗可與一抗結合,同時二抗上帶有特異的酶(如辣根過氧化物酶HRP,堿性磷酸酶法AP等 ),標記酶可以分解化學顯色底物產生有顏色的條帶或催化化學發光底物使膠片感光。
實驗步驟:
一抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時或4度一晚上(抗體濃度及孵育時間需根據不同的抗體做相應調整, 1xTBST,洗膜3次,每次5分鐘。
二抗孵育:5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度,與膜室溫孵育1小時, 1x TBST,洗膜3次,每次5分鐘。
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