產品名稱:過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒
產品型號:BC0200
產品特點:過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒測定意義:CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。
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過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒
產品名稱:過氧化氫酶測定試劑盒
產品英文名:Catalase (CAT) Assay Kit
產品貨號:BC0200 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓
產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:130
庫存狀態:現貨
關鍵字:過氧化氫酶試劑盒
簡要介紹:
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能夠分解H2O2,使反應溶液240nm下的吸光度隨反應時間而下降,根據吸光度的變化率可計算出CAT活性。
產品詳細描述
商品貨號: | 商品品牌: | 規格 | 基本售價: | 選擇規格 |
BC0200-50管/48樣 | Solarbio | 50管/48樣 | 130.00元 |
產品內容:
提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 100μL×3 瓶,4℃保存。
產品說明:
CAT(EC1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是主要的 H2O2清除酶,在活 性氧清除系統中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能夠分解 H2O2,使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時 間而下降,根據吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備 細菌或培養細胞:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個): 提取液體積(ml)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液),超聲波破碎細 菌或細胞(功率 20%或 200w,超聲 3 秒,間隔 10 秒。重復 30 次);8000g4℃離心 10 分鐘,取上 清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(ml)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
二、CAT 測定操作
1、 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長 240nm 處,蒸餾水調零。
2、 CAT 檢測工作液的配置:用時在每瓶試劑二(100μL)中加入 20ml 試劑一,充分混勻,作為工 作液;用不完的試劑 4℃保存一周。
3、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃(哺乳動物)或 25℃(其他物種)水浴 10min。
4、 取 1mLCAT 檢測工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 樣本,混勻 5s;室溫下立即測定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2
三、CAT 活性計算:
1、 血清(漿)CAT 活力的計算:
單位的定義:每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單
位。CAT(U/mL)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA
2、 組織、細菌或細胞中 CAT 活力計算:
(1) 按樣本蛋白濃度計算: 單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/mgprot)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(V 樣×Cpr)÷T=678×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算: 單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT(U/g 鮮重)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T=678×ΔA÷W
3、 按細菌或細胞中 CAT 活力計算: 單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmolH2O2降解定義為一個 酶活力單位。
CAT(U/104 cell)=﹝ΔA×V 反總÷(ε×d)×109﹞÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.356×ΔA
V 反總:反應體系總體積,1.035×10-3L;ε:H2O2摩爾吸光系數,4.36×104L/mol/cm;d:比色皿 光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.035ml;V 樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應時間,1min。 W,樣本質量,g;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/ml;500:細胞或細菌總數,500 萬。
過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒
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