β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒

產品名稱：谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒 微量法

產品英文名：Micro Glutathione S-transferase （GST）Assay Kit

產品貨號：BC0355             產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/96樣       產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：650
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：谷胱甘肽S-轉移酶| GST活性檢測|試劑盒|微量法 

簡要介紹：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質家族，主要存在于細胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分，主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合，使親電化合物變為親水物質，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目的。因此，GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外，因為GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意，GST催化的反應減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。 
產品詳細描述

商品貨號：	商品品牌：	規格	基本售價：	選擇規格
BC0355- 100管/96樣	Solarbio	100管/96樣	650.00元

產品內容： 
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 22mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 2 mL 蒸餾水溶解。

產品說明： 
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質家族，主要存在于細胞質內。GST 是體內解毒酶系統的 重要組成部分，主要催化各種化學物質及其代謝產物與 GSH 的巰基共價結合，使親電化合物變為 親水物質，易于從膽汁或尿液中排泄，達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外的目 的。因此，GST 在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外，因為 GST 具有 GSH-Px 活性，亦稱為 non-Se GSH-Px，具有修復氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質等的功能。 注意，GST 催化的反應減少 GSH 含量，但是不增加 GSSG 含量。 GST 催化 GSH 與 CDNB 結合，其結合產物的光吸收峰波長為 340nm；通過測定 340nm 波長處 吸光度上升速率，即可計算出 GST 活性。
自備儀器和用品： 低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、紫外-可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板和蒸餾水。
操作步驟： 
一、粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬 細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）； 然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
二、測定：
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 340 nm，用蒸餾水調零。
2. 試劑二放在 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）保溫。
3. 空白管：取微量石英比色皿，加入 20μL 試劑一，180μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 340nm 測定 10 s 吸光度記 A1，37℃水浴 5min 后，快速取出測定吸光度記 A2。 4. 測定管：取微量石英比色皿，加入 20μL 上清液，180μL 試劑二和 20μL 試劑三，迅速混勻后于 340nm 測定 10 s 吸光度記 A3，37℃水浴 5min 后，快速取出測定吸光度記 A4。
三、GST 活性計算： 
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
 活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活 性單位。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活性 單位。
GST（U/g 鮮重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每 10 4個細胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶 活單位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活 單位。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.23×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產物摩爾消光系數，9.6×10 3 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；V 反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建 議選用本公司生產的 BCA 蛋白質濃度測定試劑盒；W ：樣品質量，g；V 樣：加入反應體系中上清 液體積，20μL=0.02 mL；V 樣總：試劑一體積，1 mL；T：反應時間（min），5min；500：細胞數量， 500 萬。

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活 性單位。
GST（U/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個酶活性 單位。
GST（U/g 鮮重）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按細胞數量計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每 10 4個細胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一 個酶活單位。
GST（U/10 4 cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷500
（4）按液體體積計算
活性單位定義：在 25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結合為一個 酶活單位。
GST（U/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.38×[(A4－A3)－(A2-A1)] ε：產物摩爾消光系數，9.6×10 3 L/mol /cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；10 6：1mol=1×10 6μmol；
V 反總：反應體系總體積，220μL=2.2×10 -4 L；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建 議選用本公司生產的 BCA 蛋白質濃度測定試劑盒；W ：樣品質量；V 樣：加入反應體系中上清液 體積，20μL=0.02 mL；V 樣總：試劑一體積，1 mL；T：反應時間（min），5min；500：細胞數量， 500 萬。
注意事項： 
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力；
2. 細胞中 GST 活性測定時，細胞數目須在 300 萬-500 萬之間，細胞中 GST 的提取時可加試劑一后 研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞；
3. 測定前先用 1～2 個樣做預實驗，如 5min 內反應不成線性，須對樣品用蒸餾水稀釋，計算結果乘 以稀釋倍數；
4. 若樣品測定吸光度大于 1，建議對樣品用蒸餾水稀釋，計算時結果乘以稀釋倍數；
5. 測定反映的溫度對測定結果有影響，請控制在 25℃或者 37℃（哺乳動物）。

相關文獻：
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《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148
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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒