產品名稱:：谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒  微量法

產品英文名： Micro Glutathion Reductases(GR) Assay Kit

產品貨號：BC1165          產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/96樣            產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：900
庫存狀態：現貨                          
關鍵字：谷胱甘肽還原酶試劑盒|活性檢測試劑盒|GR活性檢測|試劑盒|微量法

簡要介紹：
GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，是谷胱甘肽氧化還原循環的關鍵酶之一(通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化NADPH 還原 GSSG 生成 GSH，有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR 在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用，此外 GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環途徑。
    GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時不斷消耗NADPH生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340nm吸光度下降速率；來測定NADPH脫氫速率，從而計算GR活性。


產品詳細描述
產品內容：
試劑一：液體120mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體1mL×1支，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.0mL蒸餾水，混勻。
產品說明：
GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶，GR催化GSSG還原生成GSH，是谷胱甘肽氧化還原循環的關鍵酶之一（通常昆蟲中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH，有助于維持體內GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用，此外GR還參與抗壞血酸－谷胱甘肽循環途徑。
GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH，同時NADPH脫氫生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在該波長無吸收峰；通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率，從而計算GR活性。
自備儀器和用品：
低溫離心機、水浴鍋、移液器、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸餾水
操作步驟：
一、粗酶液提取：
稱約0.1g組織，加入1.0 ml試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清液，待測。
二、GR測定操作：
1. 分光光度計或酶標儀預熱30 min以上，調節波長到340 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑一置于25℃（普通物質）或者37℃（哺乳動物）中預熱30min以上。
3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL試劑二，20μL試劑三，170μL試劑一，于340nm測定10s和190s吸光度，記為A空1和A空2。
4. 測定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入10μL試劑二，20μL試劑三，20μL上清液，150μL試劑一，于340nm測定10s和190s吸光度，記為A測1和A測2。
注：樣品測定10s時吸光度后，將比色皿放入25℃（普通物質）或者37℃（哺乳動物）水浴，3min后拿出，吸打混勻，立即測定190s時的吸光度。
三、GR活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。
GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶] ÷（Cpr×V樣）÷T
= 0.536×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每克樣品每分鐘催化1μmol NADPH氧化為一個酶活力單位。
GR酶活(U/g 鮮重)= [ (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶] ÷(V樣÷V樣總×W)÷T
= 0.536×(△A測定管-△A空白管)÷W
△A空白管=A空1-A空2，△A測定管=A測1-A測2；ε：NADPH摩爾消光系數6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，200μL=2×10^-4 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL =2×10^-2 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；V樣總：提取液體積，        1 mL；T：反應時間，3 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每毫克蛋白每分鐘催化1μmol NADPH氧化。
GR酶活(U/mg prot)= [ (△A測定-△A空白)÷(ε×d)×V反總×10⁶]÷（Cpr×V樣）÷T
   =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
活性單位定義：在一定溫度中，pH8.0條件下，每克樣品每分鐘催化1μmol NADPH氧化。
GR酶活(U/g鮮重)= [(△A測定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶]÷(V樣÷V樣總×W÷T
          =0.893×(△A測定管-△A空白管)÷W
△A空白管=A空1-A空2，△A測定管=A測1-A測2；ε：NADPH摩爾消光系數6.22×10³L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.6 cm；V反總：反應體系總體積，200μL=2×10^-4 L；10⁶：1 mol=1×10⁶μmol； Cpr：上清液蛋白濃度（mg/mL）；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中上清液體積，20μL =2×10^-2 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應時間，3 min。
注意事項：
（1）樣品處理等過程均需要在冰上進行，且須在當日測定酶活力，勻漿液避免反復凍融；
（2）試劑三須現配現用，配置完后，置于冰上；
（3）測定前須先用1～2個樣做預實驗，確保180s內吸光值變化呈線性，哺乳動物組織一般須用試劑一稀釋2～5倍；
（4）細胞中GR活性測定時，細胞數目須在300萬-500萬之間，細胞中GR的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞。

相關文獻：
《Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan》 作者: Hua Li, Lanying Wang and Yanping Luo 期刊:molecules 影響因子:3.06 PMID:30301226
《A C2H2 zinc-finger protein OsZFP213 interacts with OsMAPK3 to enhance salt tolerance in rice》 作者:Zeyong Zhang,Huanhuan Liu,Ce Sun,Qibin Ma,Huaiyu Bu,Kang Chong,Yunyuan Xu 期刊:Journal of Plant Physiology 影響因子:2.825 PMID:30055519
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影響因子:5.657 PMID:31022448
 

谷胱甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒