Trans-這個詞根有轉移、轉運、穿過等意思,well有小室的意思,可以從字面上理解,這是一類有通透性的杯狀的裝置,根據(jù)Corning公司的Transwell說明書中的介紹,可以認為這是一種膜濾器(Membrane filters),也可認為是一種有通透性的支架(permeable supports)。[1] 更準確地說,Transwell應該是一種實驗技術,這項技術的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert),其外形為一個可放置在孔板里的小杯子,不同廠家對Transwell會有不同的命名,而不同型號也可有不同形狀,不同大小,根據(jù)實驗需要,可有不同選擇。但無論是何種外形,其關鍵部分都是*的,那就是杯子底層的一張有通透性的膜,而杯子其余部分的材料與普通的孔板是一樣。這層膜帶有微孔,孔徑大小有0.1-12.0µm,根據(jù)不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。 將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。 應用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜,就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。當然不同細胞其體積不同,具體選擇時要考慮到細胞大小。 (1)共培養(yǎng)體系:小于3.0um孔徑條件下,細胞不會遷徙通過,因此,若研究不涉及細胞運動能力,不需要細胞穿過聚碳酸酯膜,則應選擇3.0µm以下孔徑。常用0.4、3.0µm。常用的是0.4µm。將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的影響。 (2)趨化性實驗:可用5.0、8.0、12.0µm膜,上室細胞可穿過聚碳酸酯膜進入下室,計數(shù)進入下室的細胞量可反映下室成分對上室細胞的趨化能力。①細胞B對細胞A的趨化作用:將細胞A種于上室,細胞B種于下室,可以研究細胞B分泌或代謝產(chǎn)生的物質(zhì)對細胞A的趨化作用。②趨化因子對細胞的趨化作用:將細胞種于上室,下室加入某種趨化因子,可研究該趨化因子對細胞的趨化作用。 (3)腫瘤細胞遷移實驗:常用8.0、12.0µm膜,上室種腫瘤細胞,下室加入FBS或某些特定的趨化因子,腫瘤細胞會向營養(yǎng)成分高的下室跑,計數(shù)進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的遷移能力。 (4)腫瘤細胞侵襲實驗常用8.0、12.0µm膜,原理與腫瘤細胞遷移實驗類似。 |